Меню

Юные формы плазмодиев малярии в мазке крови по романовскому

Лабораторные методы диагностики малярии

Диагностика малярии основана на данных клинических проявлений, эпидемиологического расследования и лабораторных методах исследования, включающих методики выявления паразитов, их количества, видовую принадлежность и обнаружение антител в организме исследуемого. Обследованию в первую очередь подлежат пациенты из группы риска — прибывшие из эндемичных по малярии регионов, лихорадка у которых появилась в первые два года после выезда из этих регионов.

Рис. 1. Забор крови для приготовления препарата «толстая капля».

Рис. 2. Окраска и вид препаратов «толстая капля» и тонкий мазок.

Диагностика малярии с использованием микроскопического метода

Микроскопия препарата «толстая капля» и тонкого мазка, позволяющая обнаружить паразитов, их количество и видовую принадлежность, является ведущим методом диагностики малярии. Она проводится при малейшем подозрении на это заболевание, независимо от температурной реакции пациента. Для определения видовой принадлежности паразитов и стадии заболевания используется тонкий мазок крови. В толстой капле локализуется больше паразитов, чем в мазке. Этот метод диагностики превосходит методику определения наличия возбудителей малярии в тонком мазке крови в 20 — 40 раз.

В периферической крови паразиты обнаруживаются через определенное время после заражения:

  • при 3-х дневной малярии — через 8 — 12 дней,
  • при тропической — от пяти с половиной дней до 12,
  • при 4-х дневной — через 15 — 21 день,
  • при малярии, подобной 3-х дневной — через 9 — 15 дней.

Паразиты в крови присутствуют как во время лихорадочного приступа, так и в межприступный период и при паразитоносительстве.

Рис. 3. Техника приготовления тонкого мазка.

Техника приготовления «толстой» капли

Полученная при проколе пальца капля крови наносится на предварительно очищенное и сухое предметное стекло и размазывается до получения пятна 1 см в диаметре. После подсушивания на воздухе предметное стекло заливается краской Романовского—Гимзы. По истечении 40-минутной экспозиции препарат ополаскивается под проточной водой и подсушивается при комнатной температуре, установленный в вертикальное положение.

Под микроскопом исследуется не менее 100 полей зрения. Более эффективным считается исследование 2-х толстых капель в течение 2,5 минут, чем 1-й капли в течение 5-и минут. 100 полей зрения просматриваются даже в том случае, когда малярийные плазмодии выявились уже в первых полях. Это производится для того, чтобы не пропустить микст-инфекцию.

Рис. 4. Микроскопия препарата «толстая капля» и тонкого мазка является ведущим методом диагностики малярии.

Порог обнаружения паразитов

Порогом обнаружения малярийных плазмодиев называется минимальная концентрация возбудителей, которую возможно выявить при микроскопировании препарата «толстая капля». При заболевании этот показатель составляет 5 паразитов в одном микролитре крови. При просмотре 100 полей зрения обследуется 0,2 мкл крови.

При наличии косвенных признаков малярии (пребывание в эндемичных зонах, гипохромная анемия, обнаружение пигмента в моноцитах) и отрицательных результатов исследования препаратов «толстая капля», исследование вновь повторяется более тщательно, и не одно, а серия, состоящая из 4 — 6 препаратов при одном уколе, либо полученных при заборе крови, который производится 4 — 6 раз в сутки в течение 2 — 3 дней.

Интенсивность паразитемии определяется знаком «+».

  • 1 (+) обозначает выявление от 1 до 100 паразитов в 10 п/зр, что соответствует 5 — 50 плазмодиям в одном мкл крови;
  • 2 (+) обозначает выявление от 10 до 100 паразитов в 10 п/зр, что соответствует 50 — 500 плазмодиям в одном мкл крови;
  • 3 (+) обозначает выявление от 1 до 10 паразитов в 1 п/зр, что соответствует 500 — 5000 плазмодиям в одном мкл крови;
  • 4 (+) обозначает выявление от 10 до 100 паразитов в 1 п/зр, что соответствует 5000 — 50000 плазмодиям в одном мкл крови;
  • 5 (+) обозначает выявление более 100 паразитов в 1 п/зр, что соответствует более 50000 плазмодиям в одном мкл крови.

Интенсивность паразитемии можно вычислить по количеству паразитов на 100 эритроцитов в 10 полях зрения, либо по соотношению числа паразитов и лейкоцитов в 1 мкл крови.

По интенсивности паразитемии определяется прогноз при тропической малярии. При других видах заболевания более 2% эритроцитов не поражается.

источник

Окраска плазмодиев малярии в мазках по Романовскому-Гимзе

Окраска микобактерий туберкулеза карбол-фуксином Циля Ход окраски

Окраска плазмодиев малярии в мазках по Романовскому-Гимзе

Окраска микобактерий туберкулеза карбол-фуксином Циля Ход окраски

1. Наливают на мазок карбол-фуксин Циля (окрашивают через фильтровальную бумагу) и подогревают над пламенем спиртовки до

появления паров. Эту температуру поддерживают в течение 1-2 мин, не доводя до кипения.

2. Сливают краску, удаляют фильтровальную бумагу и основательно промывают в водопроводной воде.

3. Дифференцируют 1% солянокислым спиртом (на 70° спирте) до тех пор, пока мазок не примет бледно-розовый или бледно-фиолетовый тон, примерно 30-60 с.

Читайте также:  Правила забора крови при малярии

4. Промывают в воде 15-30 и более секунд.

5. Докрашивают метиленовым синим Лефлера 15-30 с.

6. Основательно споласкивают в воде и высушивают фильтровальной бумагой.

Мазки, перекрашенные метиленовым синим, можно дифференцировать 70° спиртом.

Фиксация и методика окраски те же, что и для мазков крови.

Для исследования на присутствие плазмодиев, кроме мазков, берут обязательно и так называемую толстую каплю — каплю крови, размазанную в виде небольшого круга по предметному стеклу углом другого стекла. «Толстую каплю» перед окраской не фиксируют.

Методика окраски «толстой капли»

8. Промывают водопроводной водой и высушивают фильтровальной бумагой.

В результате грамположительные бактерии окрашиваются в темно-синий цвет, прочие — в красный.

Следует заметить, что в классической прописи при окраске по Граму обычно не промывают мазки в воде ни после окраски генциа-новым фиолетовым (кристаллическим фиолетовым), ни после обработки раствором Люголя, ограничиваются только сливанием растворов. Цель предлагаемого промывания в воде — только чистота в работе, оно ни в какой мере не влияет на результаты окрашивания.

1. Наливают на мазок карбол-фуксин Циля (окрашивают через фильтровальную бумагу) и подогревают над пламенем спиртовки до

появления паров. Эту температуру поддерживают в течение 1-2 мин, не доводя до кипения.

2. Сливают краску, удаляют фильтровальную бумагу и основательно промывают в водопроводной воде.

3. Дифференцируют 1% солянокислым спиртом (на 70° спирте) до тех пор, пока мазок не примет бледно-розовый или бледно-фиолетовый тон, примерно 30-60 с.

4. Промывают в воде 15-30 и более секунд.

5. Докрашивают метиленовым синим Лефлера 15-30 с.

6. Основательно споласкивают в воде и высушивают фильтровальной бумагой.

Мазки, перекрашенные метиленовым синим, можно дифференцировать 70° спиртом.

Фиксация и методика окраски те же, что и для мазков крови.

Для исследования на присутствие плазмодиев, кроме мазков, берут обязательно и так называемую толстую каплю — каплю крови, размазанную в виде небольшого круга по предметному стеклу углом другого стекла. «Толстую каплю» перед окраской не фиксируют.

Методика окраски «толстой капли»

1. На высохшую каплю наливают краску Романовского-Гимзы, обычного разведения. Продолжительность окрашивания — 30-50 мин.

2. Осторожно споласкивают в воде и затем просушивают в вертикальном положении (фильтровальную бумагу применять нельзя).

Ввиду того что гемоглобин в водных растворах краски выщелачивается, эритроциты в окрашенной капле не видны.

Морфология паразита в «толстой капле» менее ясная, чем в мазке.

В мазках, окрашенных по Романовскому-Гимзе, отчетливо видна голубая протоплазма паразита с ядром, окрашенным в розовый или красный цвет. Форма плазмодиев различна в зависимости от стадии развития. В зрелых плазмодиях определяют темно-коричневые пигментные включения. Паразиты находятся в эритроцитах, но могут располагаться и свободно.

Иммуноцитохимические, морфометрические и радиоавтографические методы исследования в цитологии подробно освещены в специальных руководствах и методических рекомендациях.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: На стипендию можно купить что-нибудь, но не больше. 9383 — | 7436 — или читать все.

источник

Плазмодии малярии в крови

Плазмодии в мазке крови у здоровых людей отсутствуют. Малярийные плазмодии поочередно паразитируют в 2 хозяевах: в организме самки комара рода Anopheles, где происходит половое размножение, спорогония, и в организме человека, где имеет место бесполое размножение, шизогония. Начальная фаза шизогонии происходит в гепатоцитах (экстраэрит-роцитарная шизогония), последующая — в эритроцитах (эритроцитарная шизогония). Развиваясь в эритроцитах, плазмодии питаются Hb и разрушают поражённые эритроциты. Все патологические проявления малярии [приступы лихорадки, анемия, спленомегалия, поражение центральной нервной системы (ЦНС) при тропической форме малярии] связаны с эрит-роцитарной шизогонией.

Паразитологическая диагностика малярии основана на обнаружении бесполых и половых форм возбудителя при микроскопическом исследовании крови, что возможно только в период его развития в эритроците. Для обнаружения плазмодиев и определения их вида используют препараты крови, приготовленные методом «тонкого мазка» и «толстой капли», окрашенные по Романовскому-Гимза. Оба метода, имеющие свои преимущества и недостатки, являются взаимодополняющими. Обнаружение в мазке крови

или толстой капле любых стадий плазмодиев (даже 1 паразита), развивающихся в эритроцитах (трофозоитов — молодых и взрослых, шизонтов — незрелых и зрелых, а также половых форм гаметоцитов — мужских и женских) — единственное бесспорное доказательство наличия малярии. Следует иметь в виду, что объём исследуемой крови в толстой капле в 20-40 раз больше, чем в тонком мазке, поэтому положительный ответ можно дать даже после исследования мазка, а отрицательный — только после исследования толстой капли с иммерсионным объективом в течение минимум 5 мин, с просмотром не менее 100 полей зрения (стандарт ВОЗ) [Лысенко А.Я., Красильников А.А., 1999]. Чувствительность метода «толстой капли» такова, что при просмотре 100-150 полей зрения можно обнаружить приблизительно 8 паразитов в 1 мкл крови. Необходимо осторожно относиться к обнаружению единственного образования, похожего на кольцевидного трофозоита в толстой капле, так как внешний вид этой стадии паразита может быть симулирован различными артефактами. Если при подозрении на малярию при однократном исследовании плазмодиев в крови обнаружить не удаётся, иногда оказывается необходимым проведение многократных исследований (при тропической малярии мазки крови следует брать каждые 6 ч на протяжении всего приступа). Различают 4 вида плазмодиев.

Читайте также:  Как можно избавиться от малярии на губах

■ P. falciparum — возбудитель тропической лихорадки, наиболее опасной формы малярии, при которой необходимо срочное лечение. У P. falciparum эритроцитарная шизогония начинается в периферическом русле крови, а заканчивается в центральном, вследствие задержки поражённых эритроцитов в капиллярах внутренних органов. В результате этого в начале инфекции в препаратах крови присутствуют только молодые трофозоиты («кольца»). Гаметоциты после созревания в капиллярах внутренних органов обнаруживаются в периферической крови на 10-12-е сутки заболевания. Выявление в периферической крови взрослых трофозоитов или шизонтов любого возраста свидетельствует о начале злокачественного течения тропической малярии и близком летальном исходе, если не будут проведены неотложные мероприятия. При других видах малярии эритроцитарная шизогония целиком протекает в периферическом кровяном русле. Гаметоциты P. falciparum в отличие от других видов плазмодиев имеют не круглую, а продолговатую форму и отличаются длительным периодом жизни. Они отмирают в течение 2-6 нед (другие виды — в течение 1-3 сут), поэтому обнаружение гаметоцитов P. falciparum в течение многих дней после излечения больного (прекращения эритроцитарной шизогонии) благодаря действию шизонтицидных препаратов — обычное явление, которое не считают показателем неэффективности терапии.

■ P. vivax — возбудитель трёхдневной малярии.

■ P. malariae — возбудитель четырёхдневной малярии

■ P. ovale — возбудитель малярии овале (типа трёхдневной).

Цикл эритроцитарной шизогонии повторяется у P. falciparum, P. vivax и P. ovale каждые 48 ч, у P. malariae — 72 ч. Малярийные приступы развиваются на той фазе цикла эритроцитарной шизогонии, когда основная масса поражённых эритроцитов разрушается и вышедшие из них дочерние особи плазмодиев (мерозоиты) инвазируют интактные эритроциты.

Для установления видовой принадлежности малярийных паразитов имеет значение следующее: наличие полиморфизма возрастных стадий или одной ведущей, их сочетание с гаметоцитами; морфология разных возрастных стадий, их размеры по отношению к поражённому эритроциту; характер, размер ядра и цитоплазмы; интенсивность пигмента, его форма, размеры зёрен/гранул; количество мерозоитов в зрелых шизонтах, их размеры и расположение по отношению к скоплению пигмента; склонность паразита к поражению эритроцитов определённого возраста (тропизм); склонность к множественному поражению отдельных эритроцитов несколькими особями паразитов и его интенсивность; размеры поражённых эритроцитов по отношению к непоражённым, форма поражённых эритроцитов, наличие азурофильной зернистости в поражённых эритроцитах; форма гаметоцитов.

При острых приступах малярии прослеживается определённая закономерность изменений крови. Во время озноба появляется нейтрофильный лейкоцитоз со сдвигом влево. В период лихорадки количество лейкоцитов несколько уменьшается. При появлении пота и при апирексии нарастает моноцитоз. В дальнейшем после 2-4 приступов появляется анемия, которая особенно рано и быстро развивается при тропической лихорадке. Анемия носит в основном гемолитический характер и сопровождается повышением содержания ретикулоцитов. В мазках крови обнаруживают пойкило-цитоз, анизоцитоз, полихроматофилию эритроцитов. При присоединении угнетения костного мозга количество ретикулоцитов уменьшается. Иногда отмечается картина пернициозоподобной анемии. СОЭ при малярии значительно повышается.

В межприступный (безлихорадочный) период в крови при всех формах малярии кроме тропической преобладают взрослые трофозоиты. В этот период болезни те или иные стадии плазмодиев присутствуют в крови постоянно, вплоть до полного прекращения эритроцитарной шизогонии. В связи с этим нет необходимости брать кровь на исследование только на высоте малярийного приступа, а можно исследовать её в любое время. Отсутствие плазмодиев малярии в мазках крови и толстой капле больного малярией отражает лишь тщательность проведённого исследования и профессиональную компетентность специалиста лаборатории.

При оценке интенсивности паразитемии учитывают суммарно бесполые и половые формы, за исключением P. falciparum. Интенсивность паразите-мии оценивают по «толстой капле» в расчёте на 1 мкл крови. Подсчиты-вается количество паразитов по отношению к определённому количеству лейкоцитов. При обнаружении 10 и более паразитов на 200 лейкоцитов подсчёт заканчивается. При обнаружении 9 и менее паразитов на 200 лейкоцитов подсчёт продолжают для определения количества паразитов на 500 лейкоцитов. При обнаружении единичных паразитов в «толстой капле» крови подсчитывают их количество на 1000 лейкоцитов. Определение количества паразитов в 1 мкл крови проводится по следующей формуле: X = A х (B / C), где: X — количество паразитов в 1 мкл крови; A — подсчитанное количество паразитов; B — количество лейкоцитов в 1 мкл крови; C — подсчитанное количество лейкоцитов.

Читайте также:  Тесты по малярии для медработников с ответами

В тех случаях, когда нет возможности определить количество лейкоцитов у данного больного, их число в 1 мкл по рекомендации ВОЗ условно принимают равным 8000.

Контроль за эффективностью лечения проводят путём исследования толстой капли крови с подсчётом паразитов в 1 мкл крови. Исследование необходимо выполнять ежедневно с 1-го по 7-й день от начала химиотерапии. При исчезновении паразитов в течение этого периода дальнейшее исследование крови проводят на 14-, 21- и 28-й день от начала лечения. При выявлении резистентности (оценивают по уровню паразитемии) и соответственно неэффективности лечения противомалярийный препарат заменяют на специфический препарат другой группы и исследование крови проводят по той же схеме [рекомендации ВОЗ, 1994].

За больными, перенёсшими тропическую малярию, устанавливают диспансерное наблюдение в течение 1-2 мес, при этом с интервалом 1-2 нед проводят паразитологическое исследование крови. Диспансеризацию больных, перенесших малярию, вызванную P. vivax, P. ovale и P. malariae, следует проводить в течение 2 лет. При любом повышении температуры тела у этих лиц необходимо лабораторное исследование крови с целью обнаружения малярийных плазмодиев.

источник

Дифференциальная диагностика возбудителей малярии в мазке крови, окрашенном по Романовскому-Гимзе

Возбудитель Признак P. ovale P. vivax P. falciparum P. malariae
Клиническая форма болезни Разновидность трехдневной Трехдневная Тропическая Четырехдневная
Продолжительность шизогонии 48 часов 48 часов 48 часов 72 часа
Стадии развития в периферической крови Все стадии шизонта и гомонты Все стадии шизонта и гомонты Кольца и гомонты; шизонты – в тяжелых случаях Все стадии шизонта и гомонты
Стадия кольца Форма перстня, размеры 1/3 – 1/2 диаметра эритроцита, иногда 2 – 3 в эритроците Форма перстня, размеры 1/3 – 1/2 диаметра эритроцита, иногда 2 – 3 в эритроците Мелкие, размер 1/6 – 1/5 диаметра эритроцита, часто 2 – 3 в эритроците Форма перстня, размеры 1/3 – 1/2 диаметра эритроцита, всегда по обному в эритроците
Шизонты Округлые, крупнее, чем у P. malariae Неправильной амебовидной формы, крупные с вакуолями Округлые, крупнее, чем у P. malariae, обнаруживаются в тяжелых случаях Округлой или лентовидной формы, размер не превышает нормальный эритроцит
Морула 6 – 12 мерозоитов, крупные 12 – 18 мерозоитов средней величины 12 – 24 мерозоита, мелкие 8 – 12 мерозоита средней величины
Гамонты Округлые Округлые, крупные, заполняют увеличенный эритроцит Полулунные Округлые, крупные, не превышают размера нормального эритроцита
Зернистость в пораженных эритроцитах Более крупная и менее обильная, чем у P. vivax (Джеймса) Мелкая, обильная, красная (Шуффнера) Выявляется редко, розово-фиолетовые пятна Маурера Гранулы гемозоина и Зиманна накапливаются в шизонте

Профилактика.Основными направлениями противомалярийной профилактики являются:

· Разрыв биоценотических связей в цепи плазмодий → комар → человек. Активный очаг заболевания становится неактивным (местные случаи малярии отсутствуют в течение трех лет после регистрации последнего больного).

· Выявление и лечение паразитоносителей как источников инвазии.

· Борьба с переносчиками малярийных плазмодиев включает проведение гидротехнических мероприятий, направленных на ликвидацию мест выплода малярийных комаров: осушение водоемов, дренаж болотистой местности, ликвидацию мелких водоемов на территории населенных пунктов.

· Биологические методы борьбы: использование энтомопатогенных бактерий, разведение личинкоядных рыб – гамбузии, мальки белого амура; применение регуляторов развития, нарушающих процессы метаморфоза насекомых.

· Массовая химиопрофилактика людей, проживающих в очаге заболевания — прием противомалярийных препаратов. Личная профилактика малярии актуальна не только для людей, проживающих в очаге заболевания, но и для лиц, выезжающих в эти регионы на отдых или работу. В последнем случае рекомендуется начать химиопрофилактику, т.е. прием лекарственных препаратов, за одну неделю до въезда в малярийный регион, продолжать прием препаратов в течение всего время пребывания в очаге, а также в течение месяца после выезда.

Токсоплазма

Рис. 1. Строение токсоплазмы. Систематика Тип Apicomplexa Класс Sporosoa – споровики Отряд Eucoccidiorida Род Toxoplasma Вид Toxoplasma gondii Заболевание · Токсоплазмоз –зоонозный протозооз с пероральным и трансплацен-тарным механизмом передачи возбудителя, характеризуется поражением нервной, лимфатической систем, глаз, миокарда, скелетных мышц и др. органов и тканей. · Протекает в виде бессимптомного носительства или острого заболевания. · T. gondii способна поражать плод – врожденный токсоплазмоз. · Является оппортунистической (СПИД-ассоциированной) инвазией. Локализация –все клетки организма человека:головной мозг, ткани глаз, сердечные и скелетные мышцы, матка, легкие, оболочка плода и т.д.

Распространениеповсеместное.

· Токсоплазма выделена практически у всех позвоночных.

· Особенно высокая зараженность регистрируется в странах с низким уровнем медицинского обеспечения населения.

Дата добавления: 2017-06-02 ; просмотров: 861 ; ЗАКАЗАТЬ НАПИСАНИЕ РАБОТЫ

источник

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *